搜索???Search
联络大家???Contact

血清脂蛋白的离心机分离技艺

2014/3/4 15:12:33??????点击:

血清脂蛋白是由血液中脂质与某些特异的蛋白质组成的一类不均一的复合物。

因其所含脂与载脂蛋白的比例不同,其密度范围在0.96g/ml或更低至1.21g/ml之间。

纸电泳中显示四条带即:乳密颗粒,极低密度脂蛋白,低密度脂蛋白,高密度脂蛋白。每种脂蛋白还可以分为更多的亚组分。

用电泳法分离含载脂蛋白较高的组份(HDL,VHDL)比较成功,而离心分离法则适合用于各种密度的血清脂蛋白分离。

 

一、梯度材料:

血清脂蛋白密度较低,常用的梯度材料为Nacl,NaI,Kbr,KI等,常用的缓冲剂为ED。
 
表一 常用梯度材料的配置及密度(20°C)
  名称 配置 密度(g/ml)
  Nacl 0.196M 1.006
  NaBr 0.804M 1.063
  NaBr 2.705M 1.21
  KBr 0.747M 1.063
  KBr 1.496M 1.21
  NaCl+KBr+EDTA 153gNaCl+354gKBr+10ml
  0. 2MEDTA+水至总量1000ml  1.35
  NaCl,NaBr
  A液:200gNaCl+800ml水
  B 液:400gNaBr+600ml水
  C液11.14gNaCl+788.6ml水(ρ=1.006gml) 10ml A液+31.7mlB液
  10ml A液+15.6mlB液
  10ml C液+2ml 1.35液
  4ml C液+6ml 1.35液 1.35
  1.31
  1.063
  1.21

二、预分离:

1、血细胞与血清分离:
  离心参数:全血,角转头,3,000rpm×20min
  结果:沉淀为血细胞,上部为血清。

2、乳糜粒分离:禁食12小时以上人血浆中乳糜粒含量极少,已进食者因其血浆含乳糜粒高,应先离心去除乳糜粒。
  离心参数:4 ×10 (g×min),10°C.各种转头转速均可。
  梯度液配置:离心管下部3/4容积加血浆,上部1/4容积加0。
  5MnaCl+0.3MEDTA,ph7.4
  结果:乳糜粒上浮,吸出。

3、血清蛋白分离:除去球蛋白,白蛋白及其它蛋白质。
  离心参数:(2。5-3)×10 (g× hr), 各种转头均可。如角转头70,000rpm× 6hrs,10°C
  配置:管容量1/3为血清,2/3为1。31g/ml,NaCl+NaBr,搅拌后终密度为1。21g/ml
  结果:管上部1/6容积为血清脂蛋白,下部5/6为其它蛋白。

 

48.3K
客服杨经理
客服徐经理
网页在线咨询
XML 地图 | Sitemap 地图